1780年意大利学者斯帕兰滋尼用19克精液给母犬输精,62天产出了3只小犬,揭开了动物人工授精的序幕。而后犬的人工授精并没有得到充分认知。直到20世纪后期,人们为了充分利用优良犬的遗传性状,解决公母犬体型大小差异较大,以及犬的择偶性较强,而产生的犬的繁殖障碍,逐渐开始重视犬的人工授精技术。
根据我们多年对犬人工授精的实践与研究,现将犬人工授精技术归纳如下。
1 采精前的准备
1.1 操作室
操作室由采精室和精液处理室组成。一般采精室和精液处理室为相邻的两个小屋。各占15m2~20m2,外室为采精室,内室为精液处理室,要求清洁、干燥、明亮,室温应为20℃左右。
1.2 仪器设备
1.2.1 输精器材:鲜精可用注射器连接塑料输精管输精,也可将牛用塑料输精导管折半或应用羊用输精管。
1.2.2 其它仪器设备:煮沸消毒器、高压灭菌器、蒸馏器、集精杯、输精器、开膣器、冰箱、恒温箱、显微镜、消毒器、温度计等。
1.3 试剂
柠檬酸钠、果糖、甘油、鸡蛋、青霉素、链霉素等。
1.4 器械及人员的准备工作
器械使用前后应进行清洗、消毒。操作人员在操作之前应将指甲剪短、磨光,操作时应戴一次性手套。
2 采精
2.1 按摩采精
2.1.1 采精犬应选择健康、无疾患、遗传性稳定的公犬,防疫应符合GB/T893的规定。
2.1.2 保定公犬。
2.1.3 采精前用经0.1%~0.2%新洁尔灭溶液浸泡的毛巾拭擦被采精犬的腹部和会阴部。
2.1.4 采精方法
手握采精法:采精操作者一手握住犬的阴茎球部,并用手掌以脉冲式按压球部刺激公犬射精,另一只手拿带有刻度玻璃管收集精液。
假阴道法采精:首先通过包皮按摩阴茎。当犬的阴茎变硬并暴露以后,将人工阴道套在阴茎球上。操作者的一只手放在公犬两后肢之间,使人工阴道紧围在阴茎球上方,另一只手持37℃~38℃集精杯接取第二段射出的精液。
2.1.5 采出的精液应立即送到精液处理室,并放在37℃~38℃温水中待检。
2.1.6 采精后,将公犬放于检查室内,牵公犬慢步行走,使阴茎回缩到包皮鞘内。
2.2 采精频率
种公犬应每隔4d采精1次,并根据公犬的实际体况灵活掌握。
3 精液品质检查
3.1 射精量
从犬集精杯上的刻度直接读取。
3.2 气味及色泽
犬正常精液应为无味或微腥,呈乳白色。
3.3 精子活力
犬精子活力检查采取10分制方法。即100%精子呈直线前进运动评1级,90%精子直线前进运动评0.9级,以此类推。新鲜精液精子活力应≥0.7;液态保存精液精子活力≥0.6。
4 精液处理
4.1 配制稀释液
4.1.1 盛装稀释液的用具洗净、消毒。
4.1.2 准确称量稀释用的药品并过滤。
4.1.3 稀释液现用现配。
4.1.4 配制卵黄稀释液先用70%酒精棉消毒,轻轻用镊子打开卵壳气室端,将卵清吸出,然后用注射器刺破卵黄膜,吸取卵黄,按需要量加入20℃~40℃稀释液中,最后加入抗生素。配制含卵黄的稀释液,应在无菌情况下冷却到20℃~40℃时加入卵黄。
4.2 操作要求
4.2.1 稀释液和精液等温稀释。
4.2.2 稀释时应将稀释液缓缓沿壁倒入精液杯,轻轻摇晃,混合均匀。
4.3 稀释液
采用以下稀释液效果较好:Tris:2.4%;柠檬酸黄:1.3%;果糖:1%;甘油:6.4%;卵黄:20%;青霉素、链霉素:各50万IU。
5 母犬发情鉴定
5.1 外部观察法
发情前期阴唇肿大,横径增大,此时触诊,深部较硬,至发情时变柔软。在排卵前阴唇横径急剧缩小,之后再度增大和再度缩小。当阴唇横径再次缩小时,即是排卵时间。在发情前期,母犬阴道内流出血样黏液,最初流出较少且比较稀薄,以后逐渐增多,到发情期血量减少,颜色变淡,应及时输精。
5.2 试情法
如母犬接受公犬闻、嗅等调情活动,公犬爬跨时母犬站立不动,将尾歪向一侧,接受公犬交配,就是发情的象征,可以输精。试情后应及时将公母犬分开。
6 输精
6.1 输精方法
助手固定母犬头颈,将母犬后躯提高与地面成60º。尾拉向一侧,暴露阴门,食指和输精管上涂少量润滑剂,将食指插入阴道(小犬用小手指),翻转食指并到达骨盆缘。将输精管沿食指插入阴道,遇阻时,将输精管后退4cm~6cm,调整角度后再推入。输精深度大犬为25cm~30cm,中等犬为20cm~25cm,小型犬为15cm~20cm。然后将输精管从阴道内抽出,输完精后应将母犬的后躯继续抬高5min~6min。
6.2 输精量
液态精液输精有效精子数应为0.5亿~1.0亿。
6.3 输精次数
母犬发情旺期进行第1次输精,24h后进行第2次输精。
在犬的人工授精过程中,应严格按照以上操作规程,作好每个环节的工作,才能获得较好的效果,提高受精率。