随着我国国民经济的迅猛发展,军、警犬得到广泛应用同时,肉用犬的饲养已经形成规模,宠物犬进入百姓家庭,尤其是国内外的名优品种,如我国的藏獒、美国的哈士奇、可卡等等。为适应我国军、警犬及生物医学和提高宠物犬品质的发展需要,我们已经采用犬的人工授精技术,这对我国犬业的发展有着重要的意义。
犬的人工授精是一种先进的科学技术,具有很多优越性,可以提高种公犬的利用率,使优良公犬能充分发挥高产的遗传性,可以减少公犬的饲养数量及降低种公犬的饲养费用,把人力、物力、财力放在优良公犬的饲养上,以提高犬的品质。选择优良的种公犬,进行采精,然后将精液输入子宫内,可以提高受胎率及产仔率。我们通过几年来的试验和推广,使犬的人工授精技术得到推广应用,受胎率达85%左右,与自然交配相似,取得成功,现将我们的在生产实践中成功做法总结如下,供广大同行和养犬基地参考。
采精
1 公犬的调教
犬是经过人类长期的饲养驯化来的,生理特点和公犬的品种性格的不同以及因个体不同,调教的效果也很不一致。有的公犬性欲较强,性格温顺,能很快适应人工采精,而有部分公犬胆怯、性欲差,则需较长时间耐心地调教。在调教过程中,要有耐心,切勿粗暴地对待,否则种公犬形成恐惧心理,更加剧了调教的困难,甚至造成人、犬的伤害。开始调教时,应选择发情旺盛、性情温驯、与公犬体格相适应的发情母犬作为“台犬”。待公犬爬上台犬后,操作人员按摩其睾丸及阴茎,使阴茎勃起,这样经数次调教即能适应人工采精操作。待种公犬习惯于人工采精,并建立了条件反射后,不再以母犬作台犬。可直接进行采精。
2 场地的准备
为了保证公犬有一个良好的性欲反射条件,必须选好采精的场地。采精场应宽敞、安静、清洁,并要彻底消毒,最好是公犬熟悉的环境,减少公犬的恐惧心理。
3 台犬的准备
目前我们多采用发情的母犬作为台犬。发情母犬的气味可以提高公犬的性欲,刺激公犬的射精。采精前台犬的后躯、尾根部、外阴部、肛门部位,都应彻底洗涤清洁,再用消毒过的干抹布擦干。
4 采精
4.1 采精方法
通常有两种方法即手握法和假阴道采精法。我们多采用前者,操作人员手戴—上乳胶手套,轻缓地抓住公犬阴茎轻缓地拉出包皮,握住阴茎球给予适当的压力,公犬的阴茎便会充分勃起。经按摩1min左右即可射精。由于公犬为分段射精,在射精间隙更换集精容器,分段收集精液。犬的射精量为2ml~15ml,分作三部分排出。第一部分是由尿道球腺分泌的水样粘液,无精子;第二部分来自睾丸,富含有精子,呈白色粘滑液体;最后部分是前列腺分泌物,容量较多,含有少量精子。在第二段射精后,公犬表现为抬起一只后腿企图越过采精者的手臂,在自然交配过程中也会发生抬后腿现象,越过母犬背部将身体转向相反方向。因此,用于人工授精的精液最好为第二段排出的精液。在收集精液时,要特别注意器具不能触及龟头,否则会造成射精停止。另外,采精手应在龟头的背部必须保持一定的压力。采到的精液要立即用等温的稀释液1∶1 稀释,并马上镜检,根据鲜精的活力和密度决定稀释倍数。
4.2 采精频度
采精频度对于公犬的性欲、采精量及精液品质均有较大的影响。如果在24h内采精3次,精子浓度即会降低、精子存活时间明显缩短。连续5天每日采精2次,畸形精子数会大大增加。因此公犬适宜的采精频度应该是1周采精2~3次。
精液的品质检查
1 精液量
大型品种的犬,射精量可30ml以上,而小型品种射精量仅有几毫升。 种公犬的射精量,因其个体、年龄、采精方法、采精频率和营养状况等多种因素影响。射精量太多,可能是由于过多的副性腺泌物或其他异物混入,若过少可能是由于采精方法不当或生殖官功能衰退所致。发现这种情况就应该改进采精技术和方法,改进种公犬饲养管理或调整采精频率。由于我们在临床一线工作,因此所接触的犬出现这些问题,都是在人工授精前期,首先对种公犬进行调教采精,进行精液品质的检查,给与技术指导,将受精过程可能出现的问题,尽量在进行人工授精前解决。
2 精液色泽
正常犬精液呈灰白色,其色泽深浅取决于精液中混合的白细胞及其他细胞的含量。若精液呈淡绿色是混有浓液,呈淡红色是其中混有血液,呈黄色是混有尿液,凡属上述颜色的异常精液,应该丢弃或停止采精,并找到病因,对相应的疾病进行治疗。
3 精子活率
是指精液中有直线前进运动的精子百分率,是评定精液品质优劣的重要指标之一,也称精子活力。检查方法是在载玻片上放1滴精液,用盖玻片压上,制成压片置于400倍的显微镜下观察。精子活率一般采用10级评分,即按精子直线前进运动的百分比评为10个等级: 100%前进者为1.0分,90%前进的为0.9分,以下类推。
4 精子密度
是指精液的单位容积(1ml)内所含精子数目,是评定精液品质的一项重要指标,也称精子浓度。我们多采用血细胞计算器计算法。
用血细胞计算器,在显微镜下计数,即将精液稀释成200倍时,则用血红细胞吸管稀释。稀释液用 3%的氯化钠溶液,以杀死精子便于计算,其计数方法与血细胞计数相同。
5 精子的畸形率
是指形状不正常的精子。精液中的畸形精子的比率越高,受孕率就越低。根据经验,犬精子畸形率不得超过10%~15%。畸形精子种类很多,如头部巨大、瘦小、细长、圆形、皱缩、缺损、双头等,颈部膨大、双体、纤细、屈折等,回旋、短小、长大、双尾等。
6 pH 值的侧定
测定的方法是用万能试纸比色来测定,犬的精液ph值平均为6.4(6.1~7.0),pH值的高低与副性腺分泌物有关,第一部分精液pH 值居中、第二部分精液的 pH值最低;第三部分精液的 pH值最高。pH值偏低的品质较好,pH值偏高的精子活力、受精力都显著降低。
精液的稀释
精液稀释的目的在于增加精液的容量,扩大配种头数。在实际操作中参考同仁的方法常用稀释液有以下三种:
1 奶粉稀释液
奶粉 10~12g,放在三角烧杯内,然后加入蒸馏水100ml,搅拌均匀后过滤,进行蒸煮消毒。
2 奶粉、卵黄稀释液
取奶粉10g先用少量水调成糊状,再加蒸馏水至100ml用纱布过滤,在水浴中加温至95℃,待冷却后加入卵黄10ml,青霉素10万IU,链霉素10万IU。
3 柠檬酸钠稀释液
柠檬酸钠(含1分子水)11.85g,葡萄糖4g,纯化水400ml,使用时加20%卵黄。
稀释倍数,一般根据原精液的密度来决定,通常犬精液可稀释l~3 倍。
输精
1 母犬的准备
将发情母犬保定后,尾巴拉向一边,将阴门及附近用温肥皂水擦洗干净,并用消毒液进行消毒,而后再用生理盐水冲洗,之后擦干净。
2 确定最佳配种时间
若能在母犬的排卵时间予以配种的话,则能收到最佳的妊娠效果。但遗憾的是到现在为止在临床实践中尚未找到一种非常可靠的确定母犬排卵时间的方法。不过用几种方法进行综合判定常能取得较好的效果。我们通过观察母犬阴道黏膜的颜色的变化和阴道细胞学检查法,间接确定母犬排卵时间。
2.1 母犬阴道黏膜的颜色的变化
雌激素的增多是以下变化的主要原因。如阴道黏膜的水肿、增生及角质化等。在间情期阴道黏膜上皮只有2~3层,故黏膜上血管明显,呈玫瑰红。而在发情期,由于雌激素的作用,阴道黏膜上皮达到15~20层,故阴道黏膜颜色变白及形成特有的浮冰样堆积。用彻底消毒的开膣器进行阴道内检查,起初开膣器的方向朝上,然后水平向前推。达到一定深度后,在专用光源的帮助下,观察阴道黏膜颜色及分泌物等。如阴道黏膜颜色苍白,黏膜肿胀程度适中,用手触及外阴根部,变软而不是肿胀的较硬,分泌物增多者多为进入排卵期。
2.2 阴道细胞学检查
阴道细胞学检查可在做阴道检查的同时用无菌的棉拭子在阴道深处轻轻擦拭一下以采得阴道黏膜上皮(阴道前庭处的阴道黏膜上皮受雌激素的影响不大,故要在阴道深处采样),然后在载玻片上轻轻的滚一下。用帕帕尼科方法,亦可用姬姆萨方法染色、阴道细胞染色的判定标准主要是根据细胞的大小、形状、细胞核与细胞浆成分的比例及核内物质的存在与否。
在发情前期向发情过渡时,浅层细胞增多,且逐渐的角质化。在接近排卵时看到的几乎都是角质化的表层细胞(80%~90%),这些细胞单个的平位于载玻片上,犹如碎玻璃片。实践证明,大约75~80%的母犬在最大角质化程度后的第1天发生排卵。
3 输精管的准备
犬的输精管可用尼龙软管、玻璃细管等自制的输精管,使用前高压灭菌彻底消毒,防止人为造成细菌感染。
4 精液的准备
由于冻精在母犬生殖道内的存活时间缩短,活力较弱,受胎率较低,因此,我们采取的新鲜精液,在水浴锅中保持35℃左右,用显微镜镜进行品质检查后用稀释液后稀释,然后进行输精。
5 输精方法
母犬的阴道向后下方倾,与脊柱呈45°,在人工输精时要注意这一生理特点。 将母犬站立保定,使输精管沿着背线方向缓慢地旋转插入阴道7~10cm深,于子宫颈口的位置,慢慢注入精液,输完精后,母犬的后躯抬高片刻,而且用右手按摩几分钟阴道口外部,刺激母犬子宫收缩,便于子宫内精子的运行,以防止精液流出。隔日进行第2次输精。犬的一次输精量为3~5 ml ,内含有效精子数1亿左右。
讨论与小结
1 具有很高的经济效益
犬人工输精节省种公犬,降低饲养成本。经试验用本交配种,公母比例为1∶5,用人工输精公母比例为1∶80~100,可提高16倍。而我们在门诊,接触的大部分为宠物犬,且多为家里只有一条母犬,缺乏优良的种公犬。因此,更加提高了种公犬的利用率,在今后的发展应该向冻精授精发展,但目前首要解决的就是提高冻精授精的受胎率技术。
2 提高人工授精的受胎率,种公犬饲养管理条件要求较高,必须喂给全价饲料,做好疾病的预防和良好的卫生条件,才能保证种公犬健康和取得良好的精液品质。
3 在犬的自然交配过程中,犬的阴茎海绵体充塞阴道,公犬阴茎根部的球状海绵体膨大,使公母犬尾对尾地“锁结”在一起。每次交配一般持续10~20分钟,使射出精液流向子宫颈进入子宫,避免精液倒流。在人工授精中我们提高后躯,用手堵住阴道口外部,按摩几分钟,就是起到使精子充分的进入子宫角的作用。
4 在人工输精过程中,应严格按照操作规程做好采精、精液品质的检查、精液的稀释和输精每个环节,才能获得较好的效果,提高受胎率。